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ATCC細胞的活性檢測方法概述

發(fā)布時間: 2025-03-24  點擊次數: 346次
  ATCC細胞作為生命科學研究中廣泛使用的細胞資源,其活性檢測是確保實驗成功的關鍵環(huán)節(jié)。準確評估ATCC細胞活性,能為科研人員提供細胞健康狀況的重要信息,助力實驗順利開展。以下介紹幾種常見的檢測方法:
  1.臺盼藍染色法
  臺盼藍染色法是一種簡單且常用的細胞活性檢測方法。臺盼藍是一種陰離子型染料,不能透過活細胞完整的細胞膜,但可進入細胞膜受損的死細胞內,使其染成藍色。具體操作時,將適量細胞懸液與一定比例的臺盼藍染液混合,在顯微鏡下觀察。統計視野中未染色的活細胞和被染成藍色的死細胞數量,通過計算活細胞占總細胞數的百分比,即可得出細胞活性。
  2.MTT比色法
  MTT比色法基于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT(一種淡黃色的四氮唑鹽)還原為不溶性的藍紫色結晶甲瓚并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。首先將細胞接種于96孔板中,培養(yǎng)一定時間后加入MTT溶液,繼續(xù)孵育。隨后棄去上清液,加入二甲基亞砜(DMSO)溶解甲瓚結晶,通過酶標儀測定各孔在特定波長下的吸光度值。吸光度值與活細胞數量呈正相關,由此可間接反映細胞活性。該方法靈敏度較高,能定量檢測細胞活性,且可用于檢測細胞增殖和細胞毒性等,但MTT還原產物甲瓚的溶解過程可能存在誤差,且MTT本身有一定毒性,對細胞有潛在影響。
  3.CCK-8法
  CCK-8法是MTT法的改進版。CCK-8試劑中含有WST-8,在1-methoxy PMS作用下,能被活細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物。其操作過程與MTT法類似,將CCK-8試劑加入培養(yǎng)有細胞的孔板中,孵育一段時間后,用酶標儀測定吸光度。該方法相比MTT法,操作更簡便,無需后續(xù)溶解步驟,且產物水溶性好,檢測結果更穩(wěn)定、準確,靈敏度更高,對細胞毒性也更小。不過,CCK-8試劑價格相對較高,成本上有一定限制。
  4.流式細胞術
  流式細胞術可對單個細胞進行多參數定量分析,用于檢測細胞活性時,常結合熒光染料。例如使用碘化丙啶(PI)和鈣黃綠素-AM雙染法。鈣黃綠素-AM可被活細胞內的酯酶水解,生成綠色熒光產物,而PI只能進入細胞膜受損的死細胞,使其發(fā)出紅色熒光。通過流式細胞儀檢測細胞的熒光強度,根據熒光信號區(qū)分活細胞、死細胞和凋亡細胞,并計算各類細胞的比例,從而精確評估細胞活性。該方法能同時獲取大量細胞的信息,分析速度快、精度高,但設備昂貴,操作復雜,對技術人員要求較高。
  每種ATCC細胞活性檢測方法都有其優(yōu)缺點和適用場景??蒲腥藛T需根據實驗目的、細胞類型以及實驗條件等因素,選擇合適的檢測方法,以準確評估ATCC細胞活性,為細胞研究工作奠定堅實基礎。




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