以下是用于制備脂質體的凍干(冷凍干燥)脂質混合物的方案的簡要概述:
將脂質溶解在氯仿中。
以適當的比例混合脂質。
使用干燥氮氣流小心蒸發(fā)有機溶劑。
將脂質混合物重新懸浮在環(huán)己烷中。如果混合物未全部溶解在環(huán)己烷中,則添加少量乙醇(環(huán)己烷體積的 1-2%)。不要使用過多的乙醇,因為過量的乙醇不會使溶液凍結。
使用干冰冷凍環(huán)己烷溶液。
快速將冷凍混合物置于高真空系統(tǒng)(凍干系統(tǒng))上。一般來說,“室內真空"系統(tǒng)對于這個過程來說不夠強大。樣品應保持冷凍狀態(tài)直至全部干燥;如果樣品開始解凍,則可能是真空不夠強,或者存在太多乙醇。解凍的樣品不會產生白色粉末,并且可能會從小瓶中隆起或起泡。
將樣品放在真空系統(tǒng)上 3-5 小時(取決于使用的環(huán)己烷量)或直到樣品全部干燥(從真空中取出時,小瓶摸起來或環(huán)己烷的氣味不應感覺冷)。注意:這會產生干燥的白色粉末,很容易懸浮在水中。另一種方法是使用適當的水性緩沖液重新懸浮通過蒸發(fā)氯仿而產生的脂質膜。
將脂質混合物懸浮在水性緩沖液中(緩沖液溫度應高于脂質的相變溫度),并讓混合物在脂質的相變溫度以上水合 30-60 分鐘(偶爾渦旋)。該過程產生大的多層囊泡(LMV 或 MLV)。對于要包埋的水溶性化合物,遵循相同的方案,不同之處在于將化合物溶解在用于重構干脂質的水性緩沖液中,并且通過凝膠過濾除去外部化合物(未封裝的)。
Frank Szoka, Jr. 和 Demetrios Papahadjopoulos,(1980),“脂質囊泡(脂質體)的比較特性和制備方法",Ann。生物物理學牧師。生物工程。,9:467-508。